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    細胞因子與酶

    His‐tag TEV Protease(煙草蝕紋病毒蛋白酶)

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    UBE-038 1000U ¥540 現貨
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    His-tag TEV Protease   煙草蝕紋病毒蛋白酶
    UBE-038 (1000U)
     

    (1)產品描述:
    TEV Protease(TEV蛋白酶)是來源于煙草蝕紋病毒(TEV)的Nla蛋白酶經改進后的27kDa的蛋白酶,經過設計后與天然TEV蛋白酶相比其穩定性更好。此蛋白酶被用來切除純化后融合蛋白的親和標簽。TEV蛋白酶具有很強的位點特異性,能夠識別EXXYXQ(G/S)的七氨基酸序列(Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-↓Gly),最普通的是ENLYFQG,其切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間。蛋白酶在G/S(或P1`)位點切割多種氨基酸序列,為切割后C端融合部分提供一個想要的N端氨基酸。在PH 7.0,30℃時可達到最佳活性,但在PH 5.5-8.5和4-30℃的廣泛范圍內TEV蛋白酶皆有活性,使得反應條件的選擇可根據目的蛋白的情況而修改。切割后也很容易利用其C端的His-tag標簽進行TEV蛋白酶清除。也可以從固定在樹脂上的融合蛋白切除掉目的蛋白。
    · 識別位點:
                          -Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly-                                                                                                                                                          
     
     · 影響天然TEV酶活性的常見因素:
    1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/ml)、Pestatin A(1 mM),EDTA(1 mM)以及E-64(3 mg/ml),以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響;
    2)Zn離子(>5 mM)對rTEV活性有抑制;
    3)與半胱氨酸反應的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。
     
    (2)反應條件:
      TEV protease蛋白酶與靶蛋白的比例是1:100(W/W), 1mg的TEV protease能切割100mg的靶蛋白,不需要計算摩爾比率。TEV protease蛋白酶可以直接加入到靶蛋白中。不需要buffer置換和稀釋TEV protease蛋白酶。TEV protease蛋白酶和靶蛋白的比例需要實驗來判斷,對于大多數靶蛋白來說TEV protease蛋白酶與靶蛋白的比例一般介于1:100-1:200(W/W)之間都是有效的。

    (3)典型實驗:
    1mg TEV protease蛋白酶能夠切割大于90%的100mg的靶蛋白在4 °C 時反應16h。

                 1:His-TEV
                 2:PQ-link-H表達載體表達的帶His-tag的Protein切割前
                 3-5:PQ-link-H表達載體表達的帶His-tag的Protein切割后(4 °C 時反應16h)
     
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